貼壁細胞培養(yǎng)時突然飄了很多怎么辦？

同學(xué)們有沒有遇到這種情況：辛辛苦苦培養(yǎng)了一批貼壁細胞，正準備美美地做實驗，有一天突然發(fā)現(xiàn)細胞變少了！細胞并不是消失了，而是在培養(yǎng)液中大量漂浮著，像一群失去了方向的氣球。你不知道該怎么辦，只能無奈地看著細胞越養(yǎng)越少。別擔心，小尚會告訴你原因和解決方法，建議速速放入收藏夾以備不時之需！

首先，同學(xué)們需要了解，細胞漂浮是一個很常見的現(xiàn)象，細胞培養(yǎng)時有部分漂浮但細胞仍然正常生長，這種情況無需特殊處理。特別是呈島狀生長的細胞，漂浮細胞看起來會比較多，保持2-3天換液一次即可，換液的同時漂浮細胞順便也被清除了。

但如果細胞突然大量漂浮，貼壁的部分明顯減少，細胞不再生長，則需要按照下面的內(nèi)容排查原因并正確處理。

看起來漂浮細胞較多，但貼壁細胞正常生長，并沒有受到影響，正常培養(yǎng)即可

細胞大量異常漂浮，貼壁細胞狀態(tài)不佳，需排查原因

1. 溫度影響

細胞不能著涼哦！貼壁比較弱的細胞如果遇到了冷的環(huán)境，會皺縮甚至脫落，換液等操作之前必須將培養(yǎng)基、PBS等試劑置于37度充分預(yù)熱。細胞不能靠近冰冷的物品，不要將剛從冰箱拿出的物品放在細胞旁邊。冬季尤其需要注意，未開空調(diào)的細胞房氣溫較低，細胞拿出培養(yǎng)箱觀察的時間不能太長，否則長時間在低溫環(huán)境下細胞也容易皺縮脫落。盡量控制觀察次數(shù)，不要太頻繁。

2. 傳代操作的影響

若消化操作不當，細胞極易受損，最終死亡漂浮。細胞在傳代消化的時候應(yīng)該注意中和的時機。一般消化時每隔30s-1min拿出觀察，直到部分細胞能自然脫落時再終止消化。避免消化不C底，強行將細胞吹下造成損傷，同時也避免消過度造成損傷。中和吹打時注意槍頭不要與細胞層接觸，離心重懸時吹打次數(shù)不宜過多，力度要輕柔，吹打時可留少許液體在槍頭內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

終止消化的時機

（重懸吹打教學(xué)視頻）

3. 培養(yǎng)基與血清的影響

若培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)試劑開封時間較長，培養(yǎng)箱CO2供氣異常等情況，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值、滲透壓異常、細胞因子降解等種種問題，從而導(dǎo)致細胞漂浮。

建議培養(yǎng)試劑開封后正確分裝儲存，并盡快使用。

血清對細胞貼壁起著至關(guān)重要的影響，血清不合適也可能導(dǎo)致細胞過多漂浮，此時應(yīng)嘗試不同品牌的血清，選擇出最合適的血清進行細胞培養(yǎng)。

CO2細胞培養(yǎng)箱要定期維護，保證細胞生長環(huán)境穩(wěn)定。

4. 細胞密度影響

細胞密度過低或過高都可能影響細胞貼壁，過低時細胞生長減慢甚至無法生長最終漂浮；細胞長滿后未及時傳代，長時間高密度培養(yǎng)，細胞將會受損漂浮。因此要注意接種密度不要過低，密度至80%及時傳代。

密度過低

密度過高

5. 培養(yǎng)器皿的影響

一般來說，培養(yǎng)貼壁細胞需要使用表面處理過的器皿。所謂表面處理，就是通過特定的方法使器皿底部具有親水性，有效提高細胞的貼壁性，大家購買培養(yǎng)器皿的時候需要多多留心。如果細胞貼壁太弱了，一碰就脫落，可以嘗試用多聚賴氨酸、膠原蛋白等物質(zhì)包被培養(yǎng)器皿，以增加細胞貼壁牢固度。

總之，如果發(fā)現(xiàn)細胞大量異常漂浮，排查原因并盡快處理通常可以解決。

希望這篇文章對你有所幫助!