293細胞該如何進行復蘇？

　　293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養瓶待細胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存,復蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適。剛復蘇的293貼壁很慢，復蘇接種后24小時內,應盡量減少觀察細胞次數或不作觀察,以免因晃動而影響細胞貼壁。復蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進行更換培養基比較合適,如果用一次性塑料培養瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養基預熱。
 

　　293細胞傳代：倒去廢液，PBS洗一次(輕)，用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復吹打至細胞全成單個懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時機為達80-90%匯合，傳代比例為1：3。
 

　　293細胞培養經驗：
 

　　1、用大瓶培養較小瓶要好，可能是更有利于293均勻的分布，利于營養的攝取。
 

　　2、培養液要新鮮，每次只配1000ml，分為2-4瓶，不用的培養液，凍存在-20度。
 

　　3、要及時傳代，建議是細胞基本鋪滿培養瓶底部，但是細胞之間還沒有貼緊，總是多少有空隙的時候好。
 

　　4、如果細胞貼壁不好，可能是消化過久，或是培養瓶不夠干凈，當然要除外細胞污染。
 

　　5、如果使用用玻璃培養瓶或皿，可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預處理培養瓶/培養皿，方法是將明膠加入培養皿，使之浸泡到底面的各個部分，然后吸出，置超凈臺內晾干即可使用。這樣處理后細胞貼壁效果好且鏡下細胞立體感強。如果是新的塑料培養瓶就不用處理。