原代細胞的培養(yǎng)問題

　　原代細胞培養(yǎng)問題：
 

　　1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？
 

　　根據傳統(tǒng)定義，自組織第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經數次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內需掌握好細胞的最大生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。
 

　　細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。
 

　　但實際上，經過長時間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細胞系隨著代數的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
 

　　需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群，除非細胞經過了遺傳改造。
 

　　2、倍增和代數有什么區(qū)別？
 

　　倍增是培養(yǎng)物中細胞總數的翻倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。
 

　　3、接收到的凍存細胞該如何處理？
 

　　收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快，以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。
 

　　4、凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)？
 

　　(1) 將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。
 

　　(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉，直到管內物體*融化。
 

　　(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉入無菌環(huán)境。
 

　　(4) 用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
 

　　(5) 打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象)。
 

　　(6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。
 

　　(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
 

　　(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃，5%CO2，95%空氣)
 

　　(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
 

　　5、細胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基？
 

　　這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
 

　　注意：凍存細胞復蘇后，在6-16小時內更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。
 

　　6、我能擴增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細胞嗎？
 

　　這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經細胞，神經膠質細胞和一些生長緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質細胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存。
 

　　然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導致細胞生長性能的改變。
 

　　7、培養(yǎng)瓶中應該加入多少體積的培養(yǎng)基？
 

　　我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。