游離脂肪酸對非洲綠猴腎細胞凋亡的影響

　　非洲綠猴腎細胞被成功的用來培養(yǎng)狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗，在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻，在醫(yī)藥研究種廣泛應(yīng)用。

　　非洲綠猴腎細胞探討脂肪酸對細胞生長的影響。利用不同種類不同濃度脂肪酸處理體外培養(yǎng)細胞，利用光鏡觀察細胞形態(tài)，后經(jīng)Hoechst/PI熒光染色和染色體DNA梯度電泳觀察細胞形態(tài)改變并確定細胞凋亡；同時應(yīng)用蛋白免疫印跡反應(yīng)檢測淘亡相關(guān)Bc1-2、Bax、Fas、P53和Caspase-3蛋白質(zhì)表達水平。實驗結(jié)果：

　　（1）光鏡觀察顯示：細胞經(jīng)脂肪酸處理后有形態(tài)上的改變，細胞產(chǎn)生不同程度的破損，這種損壞程度隨脂肪酸濃度遞增而加強。

　　（2）Hoechst/Pl染色表明：飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸都可劑量依賴性的引起Vero細胞凋亡。隨濃度升高，PI著色加深，染色質(zhì)邊集；Hoechst著色漸淡。

　　（3）DNA凝膠電泳顯示：經(jīng)脂肪酸處理的細胞DNA呈明顯的梯度分子條帶，表現(xiàn)為典型的凋亡現(xiàn)象，此現(xiàn)象隨處理濃度加大而加重。

　　（4）Western-blot分析結(jié)果表明：脂肪酸處理的細胞中，Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3蛋白表達量發(fā)生改變，其中Bax、Fas蛋白表達量隨濃度增加而顯著上調(diào)，同時，Bc1-2蛋白含量有所降低；另外，飽和脂肪酸處理組中P53蛋白表達并無太大差異，而不飽和脂肪酸組P53含量以劑量依賴性上升。

　　實驗結(jié)果表明，隨著脂肪酸濃度的升高，Vero細胞的凋亡程度有所增加，有明顯凋亡現(xiàn)象。由于Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3和P53蛋白表達發(fā)生變化，提示，這些相關(guān)基因在脂肪酸誘導(dǎo)的Vero細胞凋亡過程中起到了重要的作用。